李斯特菌鑒定試劑盒

HiListeria™ Identification Kit

概況

該試劑盒為標(biāo)準(zhǔn)化的顯色檢測(cè)系統(tǒng)，通過(guò)李斯特菌特異性的動(dòng)力學(xué)、糖發(fā)酵和生化反應(yīng)進(jìn)行鑒定。微生物的發(fā)酵反應(yīng)，引起培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化。

使用說(shuō)明

待鑒定菌種應(yīng)先進(jìn)行分離和純化?？稍?/span>PALCAM瓊脂（貨號(hào):M1064）或胰蛋白?瓊脂（貨號(hào)：M538）（含血或不含血）上挑取一個(gè)菌落，接種在５ml腦心浸膏肉湯（貨號(hào)：M210）中，在35-37℃培養(yǎng)4-6小時(shí)，           直到在620nm處，接種液濁度≥1.0OD。

無(wú)菌打開試劑盒，撕掉封條。每孔接種50μl上述菌液。也可用接種環(huán)劃線。在35℃-37℃孵育24-48小時(shí)。

結(jié)果判定

依據(jù)結(jié)果詮釋表。在第2孔、第4孔和第5孔，在24-48小時(shí)孵育期結(jié)束后，分別添加如下試劑：

1）觸酶試驗(yàn)：第1孔

     用接種環(huán)刮取第1孔內(nèi)表面，將接種環(huán)蘸到含3%H₂O2的干凈小試管中。

     接種環(huán)表面冒泡為陽(yáng)性。

     接種環(huán)表面沒有冒泡為陰性。

     注意：3%的H₂O2需新鮮配置。

2）硝酸鹽還原試驗(yàn)：第2孔

     加1-2滴對(duì)氨基苯磺酸（貨號(hào)：R015）和1-2滴N,N-二甲基-1-萘胺（貨號(hào)：R009）

     立即出現(xiàn)粉紅色為陽(yáng)性

     顏色無(wú)變化為陰性

3）七葉苷水解試驗(yàn)：第3孔

     第3孔變?yōu)楹谏?，為?yáng)性反應(yīng)。

4）伏-普試驗(yàn)：第4孔

    加3-4滴Barritt試劑A(貨號(hào)：R029)和1-2滴Barritt試劑B（貨號(hào)：R030）

    10分鐘內(nèi)出現(xiàn)粉紅色為陽(yáng)性

    無(wú)顏色變化或有輕微變化為陰性。

5）甲基紅試驗(yàn)：第5孔

     加1-2滴甲基紅試劑（貨號(hào)：I007）

     試劑保持紅色為陽(yáng)性

     試劑脫色變黃為陰性

6）糖發(fā)酵試驗(yàn)：第6孔-第12孔

     酸產(chǎn)生導(dǎo)致培養(yǎng)基顏色由紅變黃，為陽(yáng)性反應(yīng)。

     如果仍保持紅色，則為陰性。

12種生化反應(yīng)

鑒定的李斯特菌物種

格氏李斯特氏菌（Listeria grayi）

單核細(xì)胞增生李斯特菌（Listeriamonocytogenes）

英諾克李斯特菌（Listeria innocua）

斯氏李斯特氏菌（Listeria seeligeri）

伊氏李斯特氏菌伊氏亞種（Listeriaivannovii Sub sp. ivannovii）

伊氏李斯特菌倫敦亞種（Listeriaivannovii Sub sp. londoniesis）

威氏李斯特氏菌（Listeria welshimeri）

儲(chǔ)存條件及保質(zhì)期

2℃-8℃；12個(gè)月

引用文獻(xiàn)

A.K.Biswas, etal. Microbial profiles of frozen trimmings and silver sides prepared at Indianbuffalo meat packing plants. Meat Science. 2008,80(2): 418-422

AmirMasoud Shahbazi，et al. Comparativecontamination of Listeria monocytogenes in traditional dairy products inEsfahan Province, Iran. African Journal of Microbiology Research.2013, 7(16):1522-1526

NikiKharel,et al. Microbiological assessment of ethnic street foods of theHimalayas.Journal of Ethnic Foods.2016,3(3):235-241