原代細(xì)胞是一類細(xì)胞的統(tǒng)稱，具體是指從來源于活體組織，通過特定的分離方法制備得來的比較原始的一類細(xì)胞。體外培養(yǎng)原代細(xì)胞是現(xiàn)代生命科學(xué)研究生物中，十分重要的實(shí)驗手段之一。通過原代細(xì)胞的體外培養(yǎng)，使科研人員能在體外觀察并研究原始細(xì)胞的特性和行為。

原代細(xì)胞培養(yǎng)如此重要，但培養(yǎng)起來卻苦難重重。容易污染、成活率低等問題都困擾著科研人員。

本文將介紹一般的原代細(xì)胞培養(yǎng)步驟，以及一些常見的培養(yǎng)技巧和注意事項。

第一部分：準(zhǔn)備工作

在進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)之前，我們需要準(zhǔn)備以下實(shí)驗室設(shè)備和試劑：

無菌操作臺和培養(yǎng)箱：用于提供無菌環(huán)境，以防止細(xì)胞污染。

培養(yǎng)皿和培養(yǎng)瓶：用于細(xì)胞的培養(yǎng)和擴(kuò)增。

培養(yǎng)基和培養(yǎng)液：包含必要的營養(yǎng)物質(zhì)和生長因子，為細(xì)胞提供適宜的生長環(huán)境。

顯微鏡：用于觀察和評估細(xì)胞生長情況。

第二部分：原代細(xì)胞的分離與培養(yǎng)

組織收集：從動物或人體中取得待培養(yǎng)的組織，如肺、腎、皮膚等。確保收集過程無菌，并盡量迅速進(jìn)行下一步操作。

細(xì)胞分離：將組織切割成小塊，并用酶消化液（如胰蛋白酶、膠原酶等）進(jìn)行細(xì)胞的分離。注意避免酶消化時間過長，以免對細(xì)胞產(chǎn)生損傷。

細(xì)胞收獲：過濾酶消化液，將細(xì)胞懸浮液離心分離細(xì)胞。去除上清液，用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基懸浮細(xì)胞。

細(xì)胞培養(yǎng)：將細(xì)胞懸浮液均勻分布在無菌培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中，加入適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基。確保培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶的表面干凈，并避免細(xì)胞過度密集。

細(xì)胞培養(yǎng)條件：將培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶放置于恒溫培養(yǎng)箱中，溫度通常為37攝氏度。同時，保持培養(yǎng)基的穩(wěn)定性和合適的濕度。

第三部分：培養(yǎng)技巧與注意事項

避免細(xì)胞污染：在操作過程中，務(wù)必保持無菌操作，使用無菌試劑和器具，并經(jīng)常對培養(yǎng)環(huán)境進(jìn)行消毒。定期檢查細(xì)胞培養(yǎng)是否受到細(xì)菌、真菌或其他污染物的污染。

培養(yǎng)基的更換：定期更換培養(yǎng)基，以提供新鮮的營養(yǎng)物質(zhì)和細(xì)胞生長因子。根據(jù)細(xì)胞類型的需求，可以選擇使用不同的培養(yǎng)基和添加劑。

細(xì)胞傳代：當(dāng)細(xì)胞達(dá)到合適的密度時，可以進(jìn)行細(xì)胞傳代，將細(xì)胞移植到新的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中。注意傳代過程中的細(xì)胞數(shù)目和均勻性。

細(xì)胞凋亡與分化：在長期培養(yǎng)過程中，一些原代細(xì)胞可能會發(fā)生凋亡或分化。根據(jù)研究需要，可以添加適當(dāng)?shù)囊蜃踊蚋淖兣囵B(yǎng)條件來控制細(xì)胞的凋亡和分化。

原代細(xì)胞的培養(yǎng)，需要選擇一款高品質(zhì)的胎牛血清，無污染、低內(nèi)毒素、富含營養(yǎng)物質(zhì)。Ausbian進(jìn)口特級胎牛血清，通過各項嚴(yán)格的無菌檢測、內(nèi)毒素≤3EU/ml、精選自5-8月齡牛胚胎，澳洲血源，為原代細(xì)胞培養(yǎng)提供保障。