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細(xì)胞培養(yǎng)支原體抑制劑/清除劑的常規(guī)使用方法

更新時間:2023-12-05  |  點(diǎn)擊率:643

細(xì)胞培養(yǎng)是生物學(xué)領(lǐng)域重要的研究工具。支原體污染,是細(xì)胞實驗過程中常見的微生物污染之一。支原體污染,可直接影響細(xì)胞狀態(tài),造勢實驗結(jié)果可信度降低、可重復(fù)性差等問題。

 

因此,在日常實驗過程中,應(yīng)注重實驗室的清潔工作。普通細(xì)胞一旦發(fā)生支原體污染,建議直接丟棄并對實驗環(huán)境進(jìn)行消殺。如果是非常珍貴的細(xì)胞,不能隨意丟棄,則需要使用支原體抑制劑/清除劑。

 

德國Minerva Biolabs公司生產(chǎn)的支原體清除試劑系列:Zell Shield、Mynox、Mynox Gold,可高效清除支原體污染。

 

對于費(fèi)力擴(kuò)增的細(xì)胞(如已轉(zhuǎn)染,或經(jīng)過體外刺激),如果細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)有支原體污染,但此細(xì)胞又不愿丟棄,希望繼續(xù)培養(yǎng),推薦使用MB公司生產(chǎn)的復(fù)合抗生素Zell Shield。

 

(1)在每次使用Zell Shield®之前,細(xì)胞傳代時,先使用廠家推薦的“懸浮沖洗法"處理好細(xì)胞,再使用加了Zell Shield®的培養(yǎng)基養(yǎng)細(xì)胞,能達(dá)到更好的祛除支原體的效果。

(2)Zell Shield®常規(guī)為-18℃保存,建議使用前,先融化分裝,仍舊-18℃避光保存,使用時按需融化配制。避免反復(fù)凍融。

(3)Zell Shield®按1:100濃度可直接加入培養(yǎng)基。例如:500ml培養(yǎng)基中添加5ml Zell Shield®,50mL/瓶的Zell Shield®可供5L培養(yǎng)基使用。

 

若是無法長期培養(yǎng)的珍貴樣本或病毒收獲液,則推薦使用德國MB公司的Mynox® ,處理3小時,直接殺除。

 

1)將200μLMynox治療液于2.8ml培養(yǎng)液(FBS濃度未5%)混合,加入10^4-10^5個細(xì)胞。孵育2-3小時。

2)終止治療,為細(xì)胞換液。

3)使用原有正常培養(yǎng)液,傳代3-4次(FBS恢復(fù)至原有濃度)。

4)取樣,PCR檢測,鑒定支原體是否清除干凈。

 

非常珍貴的細(xì)胞或不易獲得的生物樣本,被支原體污染了,但需要挽救,不能丟棄, 例如:比較珍貴的細(xì)胞種子??刹捎弥гw清除法。若是可以培養(yǎng)超過一個月的細(xì)胞,則推薦使用德國MB公司的Mynox® Gold,直接殺除+鞏固防護(hù)兩步處理。

 

1)將500μL初次治療液與含5%FBS4.5ml培養(yǎng)液,于離心管中混合均勻。

2)將配制好的治療液培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中。

3)加入10^4-10^5個細(xì)胞。

4)培養(yǎng)細(xì)胞至80%-90%匯合度。

5)細(xì)胞傳代,將需要傳代的細(xì)胞、鞏固治療液、9.5ml原有培養(yǎng)基混合均勻后,轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶或者培養(yǎng)皿中。

6)重復(fù)(4)(52次后,再次傳代,不添加Mynox Gold

7取樣,PCR檢測,鑒定支原體是否清除干凈。


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