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3類『支原體檢測標(biāo)準(zhǔn)品』的區(qū)別及用途

更新時間:2024-01-28  |  點(diǎn)擊率:315

在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域,支原體是一類引起感染的細(xì)菌,對人類和動物的健康構(gòu)成潛在威脅。在生物制品,細(xì)胞質(zhì)量相關(guān)項(xiàng)目中用到的生物藥,需要經(jīng)過支原體檢測,以保障臨床項(xiàng)目的安全。


在用qPCR的方法進(jìn)行支原體檢測的時候,除了檢測類的試劑盒,還需要用到支原體標(biāo)準(zhǔn)品。本期內(nèi)容,我們來聊聊支原體檢測標(biāo)準(zhǔn)品的作用及意義,以及德國MB公司的三大類支原體檢測標(biāo)準(zhǔn)品的不同功能。


支原體標(biāo)準(zhǔn)品的作用


質(zhì)量控制

作為已知濃度的標(biāo)準(zhǔn),支原體標(biāo)準(zhǔn)品可用于驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室的分析方法的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。實(shí)驗(yàn)室人員可以通過與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對比,及時發(fā)現(xiàn)潛在的誤差,從而提高支原體檢測的準(zhǔn)確性。


方法驗(yàn)證

支原體標(biāo)準(zhǔn)品可用于驗(yàn)證藥典中,支原體qPCR檢測方法。通過使用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,可以評估qPCR方法的敏感性、特異性和準(zhǔn)確性。

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德國MB支原體檢測標(biāo)準(zhǔn)品


靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品

歐洲藥典第2.6.7章(EP 2.6.7)和日本藥典第G3章(JP G3)詳細(xì)描述了用于支原體的核酸擴(kuò)增技術(shù)(NAT)等檢測方法。如果將這些檢測方法用作傳統(tǒng)培養(yǎng)法的替代方法,在靈敏度方面,要求在樣品體積中每毫升檢測到10個菌落形成單位(CFU/ml)。

德國Minerva Biolabs公司的的10CFU靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品含有滅活支原體(10CFU標(biāo)準(zhǔn)品3管/盒),用于評判實(shí)驗(yàn)的靈敏度。

使用時重懸在感興趣的樣品基質(zhì)中(如EP 2.6.7 / JP G3),用所應(yīng)用的方法進(jìn)行陽性測試。大量實(shí)驗(yàn)表明,核酸法檢測中,支原體DNA提取可以幫助實(shí)驗(yàn)實(shí)現(xiàn)更高的靈敏度,提取后的10CFU提取物可直接用于PCR。


特異性標(biāo)準(zhǔn)品

德國MB公司生產(chǎn)的特異性標(biāo)準(zhǔn)品(1管支原體基因組DNA(≈10ng)+ 1管 Tris緩沖液(200μl)/盒)中,含有從目標(biāo)微生物中,以低培養(yǎng)傳代數(shù)提取的基因組DNA。用標(biāo)準(zhǔn)化的方法分析DNA起始物質(zhì),以確定DNA的完整性和數(shù)量。最終的DNA提取部分測序,以確認(rèn)物種的身份。

德國MB公司生產(chǎn)的特異性標(biāo)準(zhǔn)品,用于PCR和qPCR方法對支原體物種的特異性檢查。


PCR定量標(biāo)準(zhǔn)品

PCR定量標(biāo)準(zhǔn)包含從定義的微生物中提取的基因組DNA,在低培養(yǎng)傳代數(shù)。用標(biāo)準(zhǔn)化的方法分析DNA起始物質(zhì),以確定DNA的完整性和數(shù)量。只有瓊脂糖凝膠中顯示> 10 kb條帶且OD260/280 > 1.8的純完整DNA才能用于制造這些產(chǎn)品。DNA被部分測序以確認(rèn)物種的身份。

德國MB公司的PCR定量標(biāo)準(zhǔn)包含目標(biāo)微生物基因組拷貝的制定數(shù)量。因此,德國MB公司的定量標(biāo)準(zhǔn)品非常適合在qPCR中生成DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線。



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