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細(xì)胞支原體污染癥狀及處理方法

更新時間:2023-10-02  |  點擊率:461

細(xì)胞污染是生物實驗室中常見的問題之一,輕則引起細(xì)胞狀態(tài)改變,降低實驗結(jié)果的可重復(fù)性,重則會直接導(dǎo)致細(xì)胞的死亡,影響實驗進度。本期內(nèi)容,我們匯總了支原體污染的癥狀,并分別給出了應(yīng)對方法。

 

一、生物污染

細(xì)胞的體外生存環(huán)境,可以說是“危機四伏"??諝庵衅≈鞣N肉眼難以捕捉的微生物,稍有不慎,細(xì)胞就會被感染。不僅如此,如果實驗操作不夠規(guī)范,還有可能出現(xiàn)細(xì)胞交叉污染的情況。

 

1、支原體污染

支原體(mycoplasma)是一類沒有細(xì)胞壁、高度多形性、部分可用人工培養(yǎng)基培養(yǎng)增殖的原核細(xì)胞型微生物,大小為0.3微米左右。由于能形成絲狀與分枝形狀,故稱為支原體。在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,顯微鏡很難捕捉到它們的身影,與細(xì)胞競爭營養(yǎng),影響細(xì)胞生長,最終導(dǎo)致實驗出現(xiàn)偏差。

 

支原體的培養(yǎng)條件,與細(xì)胞培養(yǎng)條件高度重合,因此,支原體會與細(xì)胞共同競爭有限的生存資源。早有研究表明,一些支原體(包括最為常見的人型支原體、發(fā)酵支原體、精氨酸支原體等),通過精氨酸脫亞胺酶分解精氨酸來供能。當(dāng)這些支原體混入細(xì)胞培養(yǎng)體系后,會與細(xì)胞爭搶精氨酸,導(dǎo)致細(xì)胞“吃不飽飯",出現(xiàn)營養(yǎng)不良的癥狀:生長速率異常、活力下降、易脫壁等。而精氨酸又是細(xì)胞組蛋白的重要組成成分,缺乏精氨酸會嚴(yán)重影響組蛋白合成,引起染色體斷裂。再加上細(xì)胞處于長期饑餓的狀態(tài),最終導(dǎo)致細(xì)胞生長變慢甚至死亡。

 

支原體通過黏附作用與細(xì)胞結(jié)合,獲取細(xì)胞膜表面的脂質(zhì)和膽固醇,破壞細(xì)胞膜的完整性,同時影響細(xì)胞間的信號傳遞。支原體會趁機侵入細(xì)胞,增加細(xì)胞中核酸內(nèi)切酶的含量[2],導(dǎo)致細(xì)胞染色體異常進而死亡。經(jīng)過支原體的這一番操作,細(xì)胞結(jié)構(gòu)已經(jīng)被嚴(yán)重破壞,隨之而來的就是細(xì)胞形態(tài)改變、細(xì)胞易聚團、大面積細(xì)胞凋亡制造的蛋白碎片(也就是培養(yǎng)基中的碎片和小黑點)

 

正常情況下,培養(yǎng)基中養(yǎng)分會逐漸耗盡,細(xì)胞代謝廢物會逐漸累積,上清液會變成黃色,因此要定期更換培養(yǎng)基。支原體也是如此——當(dāng)培養(yǎng)體系中感染了支原體并大量繁殖的時候,會向外排放代謝產(chǎn)物,影響體系中的PH加快培養(yǎng)基變黃的速度。

 

綜上所述,如果你培養(yǎng)的細(xì)胞出現(xiàn)以下情況,基本可以確定是支原體感染了,可配合支原體檢測試劑盒(Venor®Gem OneStep,貨號:11-8025)進一步確認(rèn)。

  

如果細(xì)胞被支原體污染,該如何處理?對于一些重要程度相對較低的細(xì)胞而言,祛除支原體成分較高,因此,此類被污染的培養(yǎng)物建議直接丟棄。

對于無法長期培養(yǎng)的珍貴樣本或病毒收獲液,則推薦使用德國MB公司的Mynox® (貨號:10-0200)。含有來自枯草桿菌提取物,可特異性地與支原體膜結(jié)合,改變支原體膜通透性,從而使支原體在2-3小時內(nèi)破潰死亡。

  

若是可以培養(yǎng)超過一個月的細(xì)胞,則推薦使用德國MB公司的Mynox® Gold(貨號:10-0201),直接殺除+鞏固防護兩步處理,祛除支原體的同時,可進一步在后續(xù)培養(yǎng)中鞏固清除效果,防止支原體卷土重來"。

 細(xì)胞已發(fā)生支原體污染,但又不愿丟棄,希望繼續(xù)培養(yǎng):如已轉(zhuǎn)染或大量擴增的細(xì)胞的情況。復(fù)合抗生素成分,抑制支原體蛋白和DNA合成,也抑制細(xì)菌和真菌。先使用廠家推薦的“懸浮沖洗法"處理好細(xì)胞,再使用加了Zell Shield®(貨號:13-0050)的培養(yǎng)基養(yǎng)細(xì)胞,能達到更好的祛除支原體的效果。

 

與此同時,還應(yīng)對細(xì)胞間進行消殺。使用專業(yè)的支原體祛除試劑,更加高效、安全和便捷。實驗空間中的墻壁、實驗臺、桌椅板凳、顯微鏡、冰箱、離心機等設(shè)備和儀器,可使用Mycoplasma-off™Mycoplasma-off™ Wipes對其進行噴涂或擦拭,清除表面的多種微生物污染。對于水浴鍋、培養(yǎng)箱水槽等環(huán)境,可以選擇Water Shield™對其進行處理。講產(chǎn)品按比例直接加入水浴鍋或培養(yǎng)箱水槽中,可預(yù)防微生物污染。


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